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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與分離特征
形態與生長特征
功能特性
桿狀病毒感染特性:對苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)等桿狀病毒的易感率達 100%,病毒復制周期約 72 小時(比哺乳動物細胞病毒復制快 30%);感染后 48 小時進入裂解期,釋放病毒粒子達 10? PFU/mL,同時啟動重組蛋白的高效表達(表達量隨病毒復制同步升高)。與 DogL1 細胞的天然病毒感染不同,其病毒受體為 gp64 蛋白(表達量是其他昆蟲細胞的 2.3 倍),確保病毒高效入侵。
蛋白表達與修飾:具備完整的真核蛋白修飾系統,可實現糖基化、磷酸化等翻譯后修飾(糖基化效率達哺乳動物細胞的 70%),但糖鏈結構更簡單(以高甘露糖型為主);表達的重組蛋白可溶性率達 85%(高于大腸桿菌的 30%),且正確折疊率達 90%(通過圓二色譜驗證),尤其適合膜蛋白與復雜結構蛋白的表達(如 G 蛋白偶聯受體)。
代謝適應性:在無血清培養基中可正常生長(細胞密度達 8×10?細胞 /mL),代謝葡萄糖的速率達 5.2mmol/10?細胞 / 天,乳酸積累量僅為哺乳動物細胞的 1/5,適合高密度發酵(最高密度可達 3×10?細胞 /mL);對氧氣濃度變化敏感,溶氧維持在 30-50% 時蛋白表達量最高(低于 20% 時下降 40%)。
重組蛋白表達與功能研究
膜蛋白表達優勢:利用 SF9 細胞成功表達多種難表達膜蛋白,如昆蟲氣味受體(表達量達 250μg/mL,是 HEK293 細胞的 8 倍),通過冷凍電鏡解析其與配體結合的三維結構(分辨率 3.2?);該受體在 SF9 細胞中形成功能性二聚體(通過 FRET 實驗驗證),而在大腸桿菌中僅以包涵體形式存在,體現其在復雜蛋白表達中的優勢(DogL1 細胞因表達量低,不適合此類研究)。
蛋白相互作用分析:通過共表達技術在 SF9 細胞中構建病毒蛋白 - 宿主因子互作模型,發現桿狀病毒 IE1 蛋白與宿主細胞 Cyclin E 的結合(解離常數 1.8×10??M)可促進病毒 DNA 復制(復制效率提升 3.2 倍);免疫共沉淀結合質譜鑒定出 23 種互作蛋白,為病毒復制機制提供新見解。
病毒學研究與疫苗研發
桿狀病毒載體改造:以 SF9 細胞為宿主,構建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的重組桿狀病毒,通過熒光強度監測優化病毒載體(插入 CMV 啟動子后表達量提升 4.5 倍);該改造載體可高效轉導哺乳動物細胞(轉導效率達 70%),成為基因遞送的安全工具(無致病性)。
亞單位疫苗生產:在 SF9 細胞中表達禽liu感病毒 HA 蛋白(表達量達 180μg/mL),經純化后免疫小鼠,中和抗體效價達 1:1280(保護率 90%);與 DogL1 細胞的病毒培養疫苗相比,亞單位疫苗安全性更高(無病毒復制風險),且生產周期縮短至 14 天(傳統方法需 28 天)。
生物制藥與工業化生產
治療性蛋白生產:利用 SF9 細胞懸浮發酵生產人干擾素 -α,產量達 2.5g/L(是 CHO 細胞的 3 倍),且比活性達 1.8×10? IU/mg(與天然蛋白一致);該生產工藝通過 GMP 認證,生產成本降低 40%,已用于 veterinary 抗病du藥物研發。
生物農藥開發:構建表達 Bt 毒蛋白的重組桿狀病毒,在 SF9 細胞中大量生產病毒制劑(病毒滴度達 101? PFU/mL),田間試驗顯示對小菜蛾防治效果達 95%(持效期 14 天),比化學農藥減少環境污染。
優勢:
蛋白表達量高:與 DogL1 細胞的生理功能導向不同,其重組蛋白表達量顯著高于哺乳動物細胞,尤其適合低豐度蛋白的規模化制備,降低研究與生產成本。
培養成本低:無需 CO?培養箱(27℃恒溫即可),可適應無血清懸浮培養,大規模發酵成本僅為 CHO 細胞的 1/3,適合工業化生產。
安全性優異:桿狀病毒對脊椎動物無致病性,表達產物無病毒污染風險,生物安全性高于動物源細胞系(如 DogL1)。
局限性:
蛋白修飾差異:糖基化等翻譯后修飾與哺乳動物存在差異(如缺乏唾液酸修飾),可能影響部分蛋白的體內活性(需體外修飾彌補)。
瞬時表達特性:重組蛋白表達依賴病毒感染(裂解性),無法建立穩定表達細胞系,連續生產需反復感染(DogL1 細胞可穩定表達)。
部分蛋白不適用:對含復雜二硫鍵的蛋白折疊效率低(如抗體片段),表達量僅為哺乳動物細胞的 1/2。
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