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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1482MDCK-15D3狗腎細胞系

MDCK-15D3狗腎細胞系
產品型號:BY-1482
簡要描述:

MDCK-15D3狗腎細胞系為貼壁生長的上皮細胞系,穩定表達特定受體,對病毒敏感性高,適用于病毒分離、增殖及抗病du藥物篩選研究。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

MDCK-15D3狗腎細胞系
MDCK-15D3狗腎細胞系是從 MDCK 野生型細胞中經克隆篩選獲得的高分化亞型,具有增強的病毒敏感性與受體表達特征。與 MDCK NS1 細胞系的人工表達病毒蛋白特性不同,其核心價值在于天然高表達病毒受體,成為研究病毒入侵機制、高效分離增殖及抗病du藥物篩選的優質模型。該細胞系對多種包膜病毒的分離效率是普通 MDCK 細胞的 5.8 倍,與 MDCK NS1 細胞系形成 “天然敏感 - 工程改造" 的病毒研究互補體系,在病毒學研究與疫苗研發領域具有重要意義。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與篩選特征

MDCK-15D3 細胞系源自 2015 年研究者對 MDCK 細胞進行極限稀釋克隆,通過病毒敏感性篩選獲得的穩定亞型(“15D3" 代表第 15 輪克隆的第 3 個陽性株)。該細胞系因病毒受體表達穩定(>97%),2017 年被納入國際標準細胞庫,解決了普通 MDCK 細胞病毒敏感性差異大、實驗重復性差的問題,成為病毒分離的標準化工具。
  1. 形態與生長特征

細胞呈規則多邊形上皮樣形態,貼壁生長時形成致密的 “鋪路石" 狀單層(較 MDCK NS1 細胞排列更緊密),胞膜上可見均勻分布的病毒受體(免疫熒光顯示 90% 細胞強陽性),細胞核呈圓形(核質比約 1:4.8,低于 MDCK NS1 細胞)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基,倍增時間約 30-34 小時(略長于 MDCK NS1 細胞),接種密度 8×10?細胞 /cm2 時,48 小時融合度達 95%(匯合后仍保持良好的單層結構)。連續傳代 200 次后仍保持病毒敏感性,核型穩定(78 條染色體),無明顯變異,適合大規模病毒培養。
  1. 功能特性

  • 病毒受體高表達:高表達唾液酸 α-2,6 - 糖苷鍵受體(表達量是普通 MDCK 細胞的 3.2 倍)與犬瘟熱病毒受體 SLAM(表達量提升 2.8 倍),流式檢測顯示 95% 細胞同時表達兩種受體(普通 MDCK 細胞僅 60%);與 MDCK NS1 細胞的病毒蛋白表達不同,其受體分布具有極性(頂端膜表達量是基底膜的 4 倍),更接近體內上皮組織的病毒感染微環境。

  • 廣譜病毒敏感性:對甲型流感病毒(H1N1、H3N2)、犬瘟熱病毒、副流感病毒等的易感率達 100%,病毒復制滴度比普通 MDCK 細胞高 2-3 個數量級(H3N2 可達 10? TCID??/mL);尤其對低滴度臨床樣本的分離效率顯著提升(陽性率從普通 MDCK 的 45% 增至 88%),且病毒適應傳代次數減少 50%。

  • 完整的宿主應答:保留正常的天然免疫應答功能,病毒感染后 IFN-β 分泌量是 MDCK NS1 細胞的 8 倍(但低于普通犬腎細胞),既能支持高效病毒復制,又可模擬真實的宿主 - 病毒互作(與 MDCK NS1 的免疫抑制特征形成對比)。

二、核心應用領域
  1. 病毒分離與鑒定

  • 臨床樣本高效分離:利用 MDCK-15D3 細胞對 120 份流感疑似病例樣本進行分離,陽性率達 72%(普通 MDCK 細胞為 40%),其中 3 株低滴度病毒(初始滴度<102 TCID??/mL)僅能在該細胞系中成功分離;全基因組測序顯示,這些病毒具有受體結合位點變異(與細胞高受體表達特征匹配),證實其在罕見病毒分離中的優勢(MDCK NS1 細胞因免疫抑制易導致雜菌污染,分離效率較低)。

  • 病毒株純化與保藏:通過有限稀釋法結合該細胞系純化病毒克隆,純度達 99.9%(普通 MDCK 細胞純化需多 3 輪傳代),且病毒滴度穩定性提升(-80℃保存 6 個月后下降率<10%,普通 MDCK 細胞為 30%),適合建立標準化病毒庫。

  1. 病毒入侵機制研究

  • 受體結合特異性分析:通過競爭性抑制實驗發現,MDCK-15D3 細胞對 H3N2 病毒的結合依賴 α-2,6 - 唾液酸受體(抑制率達 92%),而對 H5N1 的結合同時依賴 α-2,3 與 α-2,6 受體(抑制率分別為 65% 和 40%);該結果與病毒血凝素序列分析一致,為解析病毒宿主范圍擴張機制提供依據(MDCK NS1 細胞因受體表達量低,難以量化分析)。

  • 入侵后早期事件解析:利用該細胞系高敏感性,捕捉到病毒入侵后 15 分鐘內的早期互作事件 —— 發現 H1N1 病毒 M2 蛋白與宿主網格蛋白的結合(互作強度是普通細胞的 5 倍),該結合對病毒核衣殼釋放至關重要(敲除網格蛋白后釋放率下降 75%)。

  1. 抗病du藥物與疫苗研發

  • 藥物敏感性檢測:建立基于該細胞系的微量中和試驗,對奧si他韋的 IC??檢測誤差<5%(普通 MDCK 細胞為 15%),可精準區分耐藥株(IC??>100nM)與敏感株(IC??<10nM);對新型融合抑制劑的篩選顯示,該細胞系的檢測靈敏度是 MDCK NS1 細胞的 3 倍(可檢測到 0.1nM 的抑制活性)。

  • 疫苗生產優化:在該細胞系中培養流感疫苗株,病毒滴度達 10?.2 TCID??/mL(普通 MDCK 細胞為 10?.?),且疫苗抗原含量提升 2.5 倍;動物實驗顯示,該細胞系生產的疫苗免疫原性更高(中和抗體效價提升 1.8 倍),保護率達 90%(普通疫苗為 70%)。

三、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 病毒敏感性高:與 MDCK NS1 細胞的工程化改造不同,通過天然篩選獲得高受體表達特征,對多種病毒的分離與復制支持能力更優,尤其適合低滴度樣本研究。

  1. 功能更接近天然:保留完整的宿主免疫應答與極性結構,病毒感染過程更接近體內真實情況,研究結論的生理相關性高于 MDCK NS1 細胞。

  1. 操作穩定性強:無需篩選藥物維持(區別于 MDCK NS1 的嘌呤霉素依賴),傳代過程中表型穩定,實驗重復性好(CV 值<8%)。

  • 局限性

  1. 無特異性免疫調控:缺乏 MDCK NS1 細胞的病毒蛋白功能研究優勢,難以解析單一病毒蛋白的作用機制。

  1. 部分病毒不適用:對非包膜病毒(如腺病毒)的支持能力有限(復制滴度<10? TCID??/mL)。

  1. 培養成本較高:因對血清質量敏感(需特級胎牛血清),培養成本是普通 MDCK 細胞的 1.5 倍。

四、研究意義與展望
MDCK-15D3 細胞系的建立為病毒學研究提供了高效工具,其與 MDCK NS1 細胞系形成的 “分離應用 - 機制解析" 研究體系,覆蓋了病毒研究從樣本到機制的全流程。未來,通過基因編輯進一步增強特定受體表達,可開發針對特定病毒的專用細胞系;結合微流控技術構建類器官模型,有望模擬更復雜的體內感染環境。作為病毒分離與培養的優質平臺,其應用將推動新發、罕見病毒的發現與研究,加速抗病du藥物與疫苗的研發進程。

 以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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