GGKD鞍帶石斑魚腎臟組織細(xì)胞系
在海洋生物研究領(lǐng)域，細(xì)胞系作為一種強(qiáng)大的研究工具，為深入了解生物的生理、病理以及遺傳特性等方面提供了重要途徑。GGKD鞍帶石斑魚腎臟組織細(xì)胞系便是其中備受矚目的存在，它為石斑魚及相關(guān)海水魚類的研究打開了新的大門。
鞍帶石斑魚，又稱龍膽石斑魚，俗稱龍膽，是我國重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類。其肉質(zhì)鮮嫩、營養(yǎng)豐富，生長快且適應(yīng)性強(qiáng)，在我國南方海水養(yǎng)殖中占據(jù)重要地位。然而，在養(yǎng)殖過程中，石斑魚常受到多種病毒的侵襲，如虹彩病毒等，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失。而腎臟作為魚類參與體液免疫的重要器官，同時也是眾多魚類病毒的重要靶器官，成為研究魚類抗病毒機(jī)制及病毒相關(guān)研究的關(guān)鍵切入點(diǎn)。
GGKD 鞍帶石斑魚腎臟組織細(xì)胞系于 2015 年 1 月 29 日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為 CCTCC NO:C201516 。它的建立經(jīng)過了復(fù)雜且精細(xì)的過程。首先選取鮮活的鞍帶石斑魚，在含有高濃度抗菌劑（濃度均為 1000IU/ml）的海水中充氣暫養(yǎng) 24 小時，以確保魚體健康且盡可能減少微生物攜帶。隨后，用醫(yī)用酒精浸泡 1 - 5 分鐘進(jìn)行整體消毒，再用 75% 酒精二次消毒，在無菌超凈工作臺內(nèi)解剖取出腎組織。將腎組織切塊后，用含有 400IU/ml 抗菌成分的 M199 溶液沖洗 4 - 6 次，以去除血細(xì)胞。接著，將處理后的腎組織加入細(xì)胞分離液在室溫下處理 20 - 30 分鐘，收集細(xì)胞懸液并加入含血清培養(yǎng)液終止處理，經(jīng)濾網(wǎng)過濾、離心等步驟后，對細(xì)胞進(jìn)行裂解血細(xì)胞處理，最終用增值培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，置于 28°C 恒溫培養(yǎng)箱開始原代培養(yǎng)，每 2 - 3 天按半量換液方式更換培養(yǎng)液。當(dāng)原代培養(yǎng)細(xì)胞長至匯合度為 60 - 90% 時，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，每 5 - 7 天傳代一次。目前，該細(xì)胞系已可連續(xù)傳至 65 代以上。
GGKD 細(xì)胞系具有諸多優(yōu)良特性。在形態(tài)上，細(xì)胞低代次時，上皮樣和成纖維樣細(xì)胞同時存在，隨著傳代的進(jìn)行，上皮樣細(xì)胞逐漸成為主要形態(tài) 。在生長特性方面，它在 M199 培養(yǎng)液中貼壁細(xì)胞多且生長速度快，相比 MEM、L - 15 培養(yǎng)液具有明顯優(yōu)勢。細(xì)胞生長速度與添加胎牛血清濃度成正比，當(dāng)胎牛血清濃度為 10 - 15% 時，細(xì)胞生長迅速，但考慮成本因素，傳至第 15 - 20 代后，胎牛血清濃度可適當(dāng)降低至 8 - 10%，此時細(xì)胞依然能維持良好的生長狀態(tài)。同時，該細(xì)胞系對石斑魚虹彩病毒敏感，且細(xì)胞病變時間快，這一特性使其在石斑魚虹彩病毒的分離、繁殖及疫苗研究中具有不可替代的作用。此外，它還能為其它海水魚類病毒的分離培養(yǎng)及疫苗研制等提供細(xì)胞材料，在魚類病毒學(xué)研究、病毒 - 宿主細(xì)胞相互作用研究以及外源基因功能研究等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。例如，通過轉(zhuǎn)染實驗，將綠色熒光蛋白報告質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 GGKD 細(xì)胞中，能觀察到明亮的熒光，表明該細(xì)胞系可用于體外基因功能鑒定 。在病毒感染實驗中，感染石斑魚虹彩病毒后，細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器如線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會發(fā)生變化并聚集在病毒工廠周圍，這為深入研究病毒 - 宿主相互作用提供了重要的研究模型。
GGKD 鞍帶石斑魚腎臟組織細(xì)胞系憑借其獨(dú)te的生物學(xué)特性和廣泛的應(yīng)用價值，已成為海洋生物研究，尤其是石斑魚相關(guān)研究領(lǐng)域中不可huo缺的寶貴資源，為推動海水魚類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展以及海洋生物科學(xué)的進(jìn)步提供了有力支撐。
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