MSMF鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系
MSMF鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系作為針對(duì)鱸魚(yú)心臟成纖維組織的特異性細(xì)胞模型，在海水魚(yú)類心臟結(jié)構(gòu)維持、損傷修復(fù)及心血管疾病研究領(lǐng)域具有重要價(jià)值。它的建立為深入探究鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞的生理功能、與心肌細(xì)胞的相互作用以及病原體感染機(jī)制等提供了穩(wěn)定的體外研究平臺(tái)，對(duì)鱸魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展意義重大。
鱸魚(yú)是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖魚(yú)類，肉質(zhì)鮮美，生長(zhǎng)速度快，在沿海地區(qū)養(yǎng)殖規(guī)模龐大。心臟成纖維細(xì)胞作為心臟組織中的主要間質(zhì)細(xì)胞，雖不直接參與收縮功能，卻承擔(dān)著合成細(xì)胞外基質(zhì)、維持心臟結(jié)構(gòu)完整性、參與心臟損傷修復(fù)等關(guān)鍵作用，其功能異常會(huì)導(dǎo)致心臟纖維化等病變，影響心臟正常功能。在養(yǎng)殖過(guò)程中，鱸魚(yú)的心臟易受水溫變化、水質(zhì)污染、病原菌侵襲等因素影響，引發(fā)心臟疾病，導(dǎo)致生長(zhǎng)受阻、死亡率上升。因此，建立 MSMF 鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系，對(duì)于揭示心臟成纖維細(xì)胞的生理機(jī)制、研發(fā)心血管疾病防控技術(shù)具有重要的理論和實(shí)踐意義。
MSMF 鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系的建立經(jīng)過(guò)了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的操作流程。選取健康的鱸魚(yú)，經(jīng)嚴(yán)格的無(wú)菌處理后，在超凈工作臺(tái)中小心解剖分離出心臟組織，去除心bao膜及大血管。將心臟組zhi剪碎成 1mm3 左右的小塊，用含雙抗的磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，以清除血細(xì)胞和雜質(zhì)。隨后加入 0.25% 胰dan白酶和 EDTA 混合溶液，在 25℃條件下消化 30-40 分鐘，使細(xì)胞分散。收集細(xì)胞懸液，經(jīng) 70μm 細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾后，1000r/min 離心 5 分鐘，棄上清，用含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中，置于 25℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，每 2-3 天更換一半培養(yǎng)液，待細(xì)胞匯合度達(dá)到 70%-80% 時(shí)進(jìn)行傳代，目前該細(xì)胞系已穩(wěn)定傳代至 45 代以上，細(xì)胞活力保持在 85% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，排列疏松，胞質(zhì)豐富，具有明顯的極性和較強(qiáng)的貼壁生長(zhǎng)能力。生長(zhǎng)特性研究顯示，MSMF 細(xì)胞在 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長(zhǎng)狀態(tài)優(yōu)良，相較于其他培養(yǎng)基，細(xì)胞增殖速度提高約 25%；最適培養(yǎng)溫度為 24-26℃，與鱸魚(yú)的自然生存水溫相符；當(dāng)胎牛血清濃度為 10% 時(shí)，細(xì)胞群體倍增時(shí)間最短，約為 60 小時(shí)。傳代至 35 代后，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率無(wú)明顯變化，核型分析表明其染色體數(shù)目穩(wěn)定，遺傳穩(wěn)定性良好。
在功能特性方面，MSMF 鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系展現(xiàn)出豐富的成纖維細(xì)胞功能。免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞表達(dá)成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物如波形蛋白、Ⅰ 型膠原蛋白，進(jìn)一步證實(shí)了其成纖維細(xì)胞屬性。該細(xì)胞系具有較強(qiáng)的分泌功能，能合成和分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)成分，模擬體內(nèi)心臟間質(zhì)的構(gòu)建過(guò)程，這對(duì)研究心臟結(jié)構(gòu)維持機(jī)制具有重要意義。同時(shí)，MSMF 細(xì)胞在心肌細(xì)胞損傷模型中能表現(xiàn)出增殖活躍、遷移能力增強(qiáng)等特性，模擬心臟損傷后的修復(fù)反應(yīng)，為研究心臟修復(fù)機(jī)制提供了理想模型。此外，該細(xì)胞系對(duì)鱸魚(yú)常見(jiàn)的病原菌如鰻弧菌、溶藻弧菌等表現(xiàn)出敏感性，感染后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)改變、分泌功能異常等病變特征，為研究病原菌對(duì)心臟間質(zhì)組織的影響機(jī)制提供了良好材料。
MSMF 鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞系在多個(gè)研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。在心臟纖維化機(jī)制研究中，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞在不同刺激下的基質(zhì)分泌變化，揭示了鱸魚(yú)心臟纖維化的發(fā)生途徑；在環(huán)境適應(yīng)研究中，利用該細(xì)胞系評(píng)估了水溫、鹽度等環(huán)境因素對(duì)心臟成纖維細(xì)胞功能的影響，為鱸魚(yú)養(yǎng)殖環(huán)境優(yōu)化提供了依據(jù)；在藥物篩選方面，建立了基于細(xì)胞活性和基質(zhì)分泌功能的篩選模型，已篩選出多種具有抑制心臟纖維化作用的化合物。
作為穩(wěn)定可靠的鱸魚(yú)心臟成纖維細(xì)胞模型，MSMF 不僅填bu了鱸魚(yú)心臟間質(zhì)細(xì)胞研究的空白，更為海水魚(yú)類心臟支持組織生物學(xué)研究提供了重要工具，推動(dòng)了鱸魚(yú)心血管疾病防控技術(shù)的研發(fā)，對(duì)保障鱸魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。
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