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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與構建:該細胞系源自 CHO-K1 細胞(CHO 細胞的經典亞株),通過載體介導(如含 EF1α 啟動子的表達質粒)將 S2-HSA 融合基因導入細胞,經嘌呤霉素抗性篩選及單克隆純化獲得穩定株。“S2-HSA" 代表其表達的融合蛋白(S2 片段與人類血清白蛋白的融合產物),明確標識其功能特性,確保蛋白表達的均一性與持續性。
形態與增殖:體外培養呈典型上皮樣形態,貼壁生長,細胞呈多邊形,排列緊密,形態與親本 CHO-K1 細胞一致。在 37℃、5% CO?條件下,增殖穩定,傳代周期約 24-30 小時,可適應含 10% 胎牛血清的 F12K 培養基,兼容無血清培養體系,傳代 50 次以上仍能維持穩定形態與活性,貼壁能力強,為大規模培養提供便利。
表達特征:S2-HSA 融合蛋白主要分泌至細胞外培養基中,表達量可達 10-15μg/10?細胞 / 24 小時(通過 ELISA 檢測),長期傳代(>40 代)后表達量波動<10%。該融合蛋白保留 S2 片段的生物學活性與 HSA 的半衰期延長特性,能與特異性抗體結合,且翻譯后修飾(如糖基化)與天然蛋白一致,為功能研究與應用開發奠定基礎。
重組融合蛋白功能研究
生物制藥與蛋白生產
蛋白表達系統優化研究
優勢:S2-HSA 融合蛋白表達穩定,分泌效率高,便于純化;遺傳背景清晰,與 CHO-K1 細胞同源性高,實驗重復性好;兼容貼壁與懸浮培養,可規模化生產,滿足工業化需求;蛋白翻譯后修飾接近天然狀態,生物活性保留完整,適合臨床前研究。
局限性:長期培養需維持抗性篩選壓力,增加培養成本;融合蛋白的糖基化模式與人類細胞存在細微差異,可能影響部分功能研究的外推性;對培養基中血清成分敏感,無血清適應需 6-8 周的馴化周期。
培養條件:基礎培養基為含 10% 胎牛血清的 F12K 培養基,添加嘌呤霉素(2μg/mL)維持抗性篩選,同時加入谷an酰胺與非必需氨基酸促進增殖。傳代時控制融合度在 60%-70%,用 EDTA - yi酶溫和消化,避免過度處理影響細胞活性。懸浮培養可采用無血清培養基,逐步降低血清濃度至 0.5%,最終細胞密度可達 3×10?個 /mL。
蛋白純化與檢測:收集培養上清后,通過 Protein A 親和層析純化 S2-HSA 融合蛋白,純度可達 95% 以上;通過 Western blot 驗證蛋白分子量,ELISA 檢測濃度,確保蛋白質量。凍存時使用含 10% DMSO 的wan全培養基,液氮保存,復蘇后傳代 2 次待狀態穩定后再用于實驗,保證結果可靠性。
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