來源與構(gòu)建：該細胞系以 CHO-K1 細胞為親本，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將含人 CD14 基因的表達載體（含 CMV 啟動子與新mei素抗性基因）導入細胞，經(jīng) G418 篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株。“CD14" 明確標識其表達的功能分子，與普通 CHO-K1 細胞形成顯著區(qū)分。其保留卵巢上皮樣細胞的基本形態(tài)，同時因 CD14 表達呈現(xiàn)特異性功能特征：可通過 CD14 識別脂多糖（LPS）等配體，激活下游 TLR4/NF-κB 信號通路，模擬天然免疫細胞的模式識別功能。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細胞呈多邊形，排列規(guī)則，邊界清晰，核質(zhì)比正常。在 37℃、5% CO?條件下，增殖穩(wěn)定，傳代周期約 24-30 小時，可適應含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，無需特殊生長因子，傳代 60 次以上仍能維持 CD14 高表達（表達量為親本細胞的 20-30 倍），功能活性無明顯衰減，顯著優(yōu)于瞬時轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。

表達特征：CD14 分子主要定位于細胞膜（通過免疫熒光驗證），少量存在于胞質(zhì)中，表達量達（1.2-1.8）×10?分子 / 細胞（流式細胞術(shù)檢測）。該分子保留天然構(gòu)象，能特異性結(jié)合 LPS（解離常數(shù) Kd≈5×10?? M），并介導 LPS 誘導的 NF-κB 核轉(zhuǎn)位及 IL-6、TNF-α 等炎癥因子分泌（ELISA 檢測顯示分泌量隨 LPS 濃度升高而增加），功能活性接近人單核細胞來源的 CD14。

優(yōu)勢：CD14 表達量高且穩(wěn)定，長期傳代后功能活性波動＜10%，實驗重復性優(yōu)于原代細胞；遺傳背景清晰，與 CHO-K1 細胞同源性高，便于通過親本對照排除非特異性效應；可同時表達 CD14 及共受體（如 TLR4），完整模擬天然信號傳導環(huán)境，功能更接近體內(nèi)狀態(tài)；培養(yǎng)條件簡單，兼容貼壁與懸浮培養(yǎng)，適合大規(guī)模藥物篩選。

局限性：作為倉鼠細胞，CD14 下游信號分子的物種差異可能導致部分通路激活效率與人類細胞不同；缺乏天然免疫細胞的其他模式識別受體，無法wan全模擬復雜的免疫微環(huán)境；高表達 CD14 可能導致細胞對 LPS 過度敏感，實驗需嚴格控制配體濃度。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，添加 G418（400μg/mL）維持抗性篩選，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中生長良好。傳代時控制融合度在 70%-80%，采用溫和消化方法分離細胞，避免機械損傷影響 CD14 表達。進行功能實驗時，建議使用無血清培養(yǎng)基饑餓處理 12-24 小時，減少血清成分對信號通路的干擾。

質(zhì)控與安全：定期通過流式細胞術(shù)檢測 CD14 膜表達量，Western blot 驗證蛋白完整性；STR 鑒定確保細胞純度，避免交叉污染。因涉及 LPS 等生物試劑，操作需符合生物安全二級標準，凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，液氮保存可維持活性 5 年以上。