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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1398Vero/Slam/V非洲綠猴腎細(xì)胞系


廠家實力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來源與改造機制
形態(tài)與生長特征
功能特性
Slam 表達(dá)與定位:Slam 主要定位于細(xì)胞膜表面,表達(dá)量達(dá) 1.2×10?分子 / 細(xì)胞(流式細(xì)胞術(shù)定量),較親本細(xì)胞高 20 倍以上,且呈均一性表達(dá)(變異系數(shù)<8%),為病毒感染提供均一的受體環(huán)境。
病毒敏感性:對麻疹病毒的感染效率達(dá) 98%(免疫熒光檢測核蛋白 NP),感染后 48 小時病毒滴度達(dá) 10?-10? PFU/mL,較 Vero 細(xì)胞高 2-3 個數(shù)量級;對犬瘟熱病毒、小反芻獸疫病毒等其他副黏病毒也具有廣譜敏感性,滴度提升 1-2 個數(shù)量級。
生物安全性:無致瘤性(裸鼠接種實驗陰性),外源病毒與支原體檢測均為陰性,符合人用疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)要求。
麻疹病毒研究與疫苗生產(chǎn)
病毒分離與分型:作為麻疹病毒分離的 “金標(biāo)準(zhǔn)" 改造細(xì)胞系,臨床樣本接種后分離效率達(dá) 96%,較傳統(tǒng) Vero 細(xì)胞高 40%,可通過蝕斑形態(tài)差異區(qū)分疫苗株與野毒株(疫苗株蝕斑較小且邊緣規(guī)則)。其分離的病毒株經(jīng)全基因組測序驗證,遺傳一致性達(dá) 99.5%,為麻疹病毒基因型監(jiān)測提供標(biāo)準(zhǔn)化毒株。
減毒活疫苗生產(chǎn):因病毒產(chǎn)量高且安全性可靠,已用于麻疹減毒活疫苗的工業(yè)化生產(chǎn)。在微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中,麻疹病毒滴度達(dá) 5×10? PFU/mL,單批次 500L 反應(yīng)器可生產(chǎn) 500 萬劑疫苗,批間差異<5%,疫苗中殘留宿主細(xì)胞 DNA<10pg / 劑,符合 WHO 規(guī)定的生物制品標(biāo)準(zhǔn)。
其他副黏病毒研究與診斷
跨物種病毒研究:對犬瘟熱病毒(CDV)的敏感性顯著提升,感染后可觀察到典型細(xì)胞病變(多核合胞體形成),為 CDV 的跨物種傳播機制研究提供模型。例如,通過比較不同動物源 Slam 受體在該細(xì)胞中的表達(dá)差異,揭示了 CDV 從犬向熊貓傳播的受體適應(yīng)性突變。
快速診斷應(yīng)用:可用于副黏病毒感染的病原學(xué)診斷,將臨床樣本接種后 48 小時內(nèi)通過免疫熒光檢測病毒抗原,診斷符合率達(dá) 92%,較傳統(tǒng) RT-PCR 方法縮短檢測時間 24 小時,為疫情快速響應(yīng)提供技術(shù)支持。
抗病du藥物篩選與機制研究
藥物活性評估:基于其高病毒產(chǎn)量,可構(gòu)建高通量藥物篩選模型。例如,通過檢測融合抑制劑對麻疹病毒包膜與細(xì)胞膜融合的阻斷效果,測定其 EC??=0.8μM,與動物實驗結(jié)果一致性達(dá) 0.93,為抗麻疹病du藥物研發(fā)提供可靠數(shù)據(jù)。
病毒入侵機制解析:利用該細(xì)胞系研究麻疹病毒與 Slam 的相互作用,已鑒定出 Slam 的 D1 結(jié)構(gòu)域是病毒結(jié)合的關(guān)鍵位點,為靶向受體的抗病du藥物設(shè)計提供分子靶點。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入非必需氨基酸提升細(xì)胞活力。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時,棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 3-5 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,按 1:4 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過度融合導(dǎo)致 Slam 表達(dá)下調(diào)。
凍存保護(hù):取對數(shù)生長期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達(dá)穩(wěn)定)。
病毒培養(yǎng)與檢測
麻疹病毒接種:細(xì)胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時至融合度 70%,用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.01),37℃吸附 1 小時,換含 2% 血清的維持液,72 小時后通過蝕斑實驗測定病毒滴度,或通過免疫熒光檢測 NP 蛋白評估感染效率。
藥物篩選操作:感染前 1 小時加入待篩藥物,感染后繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時,通過 CCK-8 檢測細(xì)胞活力(排除毒性),同時檢測病毒產(chǎn)量,計算藥物抑制率與選擇指數(shù)(SI=CC??/EC??)。
優(yōu)勢:
病毒敏感性突出:對麻疹病毒等副黏病毒的感染效率與產(chǎn)量顯著優(yōu)于親本 Vero 細(xì)胞,縮短實驗周期并提升數(shù)據(jù)可靠性。
生物安全性高:保留 Vero 細(xì)胞的無致瘤性特征,符合疫苗生產(chǎn)的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用轉(zhuǎn)化潛力大。
操作簡便:貼壁生長穩(wěn)定,傳代與凍存流程成熟,適合標(biāo)準(zhǔn)化實驗室與工業(yè)化生產(chǎn)。
局限性:
受體依賴性:僅對依賴 Slam 的病毒有效,對其他受體介導(dǎo)的病毒(如脊髓灰質(zhì)炎病毒)敏感性無提升,應(yīng)用范圍受限。
血清依賴度:在無血清培養(yǎng)基中 Slam 表達(dá)量下降約 30%,病毒產(chǎn)量降低,增加工業(yè)化生產(chǎn)成本。
傳代限制:傳代>80 次后病毒敏感性下降約 25%,需定期復(fù)蘇早期凍存細(xì)胞。
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