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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1399Vero E6-S非洲綠猴腎細胞懸浮適應株細胞系

Vero E6-S非洲綠猴腎細胞懸浮適應株細胞系
產品型號:BY-1399
簡要描述:

Vero E6-S非洲綠猴腎細胞懸浮適應株細胞系,Vero E6-S 為非洲綠猴腎細胞 Vero E6 的懸浮適應株,上皮樣,懸浮生長,保留對冠狀病毒敏感性,支持高效復制,適用于病毒大規模培養及疫苗工業化生產。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

Vero E6-S非洲綠猴腎細胞懸浮適應株細胞系
Vero E6-S非洲綠猴腎細胞懸浮適應株細胞系,Vero E6-S 細胞系是非洲綠猴腎 Vero E6 細胞經懸浮馴化獲得的適應株,保留親本細胞對冠狀病毒等的高敏感性,同時具備懸浮生長特性,成為病毒大規模培養及疫苗工業化生產的核心細胞模型。其突破傳統貼壁培養的局限,為冠狀病毒等病原體的生物制品研發提供了高效生產平臺。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與適應機制

Vero E6 細胞源自 Vero 細胞的克隆株,而 Vero E6-S 通過逐步馴化獲得:將貼壁 Vero E6 細胞接種于無血清懸浮培養基,初始以 5×10? cells/mL 密度培養,每 3 天傳代一次,逐步降低血清濃度(從 5% 降至 0),經 50 代篩選后獲得穩定懸浮生長的細胞群體(“S" 代表 suspension 懸浮)。其適應機制與細胞黏附分子(如整合素 β1)表達下調、細胞骨架重塑相關,使細胞擺脫對基質的依賴,形成直徑 80-150μm 的松散細胞團。
  1. 形態與生長特征

細胞呈上皮樣與圓形混合形態,懸浮生長時以細胞團為主(含 10-50 個細胞),部分單個細胞游離,胞質均勻,核質比高。在 37℃、5% CO?的懸浮培養體系中,使用含 0.1% Pluronic F-68 的 SFM 培養基(添加重組生長因子),倍增時間約 36-42 小時,最高細胞密度可達 4×10? cells/mL,比生長速率(μ)達 0.019/h,顯著高于貼壁 Vero E6 細胞(0.014/h)。凍存復蘇存活率超 85%,連續傳代 60 次后生長特性無顯著變化,符合 GMP 生產規范。
  1. 功能特性

  • 病毒敏感性:保留對冠狀病毒的高易感性,感染 SARS-CoV-2 后 48 小時病毒滴度達 10? TCID??/mL,與貼壁 Vero E6 細胞相當;對中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)、寨卡病毒等也具有敏感性,滴度較貼壁培養提升 10%-15%。

  • 受體表達:血管緊張素轉換酶 2(ACE2)表達量達 9×10?分子 / 細胞(流式檢測),與貼壁細胞無顯著差異,為冠狀病毒入侵提供充足受體。

  • 代謝特性:葡萄糖消耗速率為 25 mg/10? cells / 天,乳酸積累量較貼壁細胞降低 25%,更適合高密度長時間培養。

二、核心應用領域
  1. 冠狀病毒疫苗生產

  • 滅活疫苗規模化生產:在 1000L 攪拌式生物反應器中,Vero E6-S 細胞密度達 3×10? cells/mL,SARS-CoV-2 病毒滴度穩定在 10?.? TCID??/mL,單批次病毒產量達 3×1011 TCID??,可生產 3000 萬劑滅活疫苗,較轉瓶工藝效率提升 15 倍,生產成本降低 50%。疫苗中宿主細胞蛋白殘留量<30ng / 劑,符合 WHO 標準。

  • 病毒樣顆粒(VLP)表達:作為重組桿狀病毒的宿主細胞,可高效表達冠狀病毒 S 蛋白 VLP,產量達 5μg/10? cells,純度超 90%,免疫小鼠后中和抗體效價達 1:1280,為亞單位疫苗研發提供低成本生產平臺。

  1. 病毒學研究與藥物篩選

  • 病毒復制動力學研究:利用懸浮培養的均一性,精準測定 SARS-CoV-2 復制參數:潛伏期 8-10 小時,對數期 12-24 小時,平臺期 24-48 小時,為優化疫苗生產工藝提供數據支撐。

  • 高通量藥物篩選:在 96 孔懸浮培養板中,可同時檢測 200 種以上化合物的抗病毒活性,篩選效率較貼壁培養提升 4 倍。例如,通過該模型篩選出的 3CL 蛋白酶抑制劑,對 SARS-CoV-2 的 EC??=1.2μM,與動物實驗結果一致性達 0.90。

  1. 診斷試劑研發

  • 抗原制備:大量培養的病毒可用于制備冠狀病毒診斷抗原,如 S 蛋白與 N 蛋白,ELISA 試劑盒敏感性達 98%,特異性>99%,較傳統貼壁培養抗原批間差異降低 60%。

  • 中和抗體檢測:作為病毒中和實驗的標準細胞,其懸浮培養的均一性使檢測變異系數<5%,結果穩定性顯著優于貼壁細胞,已被納入多個國家的新guan疫苗臨床評價標準。

三、培養與實驗操作要點
  1. 基礎培養方案

  • 培養基:無血清 SFM 培養基添加 4mM 谷an酰胺、0.1% Pluronic F-68,pH 維持在 7.2-7.4,每日監測溶氧(維持 30%-50%)與葡萄糖濃度(>1.5g/L)。

  • 傳代流程:取對數期細胞懸液,1200rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養基重懸,按初始密度 8×10? cells/mL 接種至搖瓶(轉速 110rpm),避免細胞團過大(>200μm)導致營養不均。

  • 凍存保護:取密度 2×10? cells/mL 的細胞,加入含 10% DMSO 的凍存液(SFM 培養基配制),程序降溫后液氮保存,復蘇時 37℃水浴解凍,直接接種至預熱培養基(無需離心洗滌)。

  1. 病毒培養與放大

  • 冠狀病毒接種:細胞密度達 2×10? cells/mL 時,按 MOI=0.05 加入病毒液,37℃培養,感染后 24 小時補加 50% 體積新鮮培養基,48-72 小時收獲病毒液,通過 0.45μm 濾膜澄清。

  • 生物反應器控制:采用 pH-stat 補料策略,當 pH>7.3 時補加葡萄糖溶液(500g/L),維持代謝穩定,可延長病毒復制期 12 小時,滴度提升 20%。

四、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 規模化生產能力:懸浮培養可通過生物反應器實現大規模擴增,單批次產量滿足千wan級疫苗需求,適合突發疫情應急生產。

  1. 工藝穩定性:細胞生長與病毒復制均一性高,批間差異<8%,便于質量控制與工藝驗證。

  1. 成本效益:較貼壁培養減少 90% 的培養面積需求,人力成本降低 60%,適合工業化大生產。

  • 局限性

  1. 培養基成本:無血清 SFM 培養基價格為傳統培養基的 4 倍,初期投入較高。

  1. 技術門檻:需掌握懸浮細胞計數、反應器參數調控等技能,對操作人員要求嚴格。

  1. 病毒譜局限:主要適用于冠狀病毒等少數病毒,對其他病毒支持能力有限。

五、研究意義與展望

Vero E6-S 懸浮適應株的建立推動了冠狀病毒疫苗生產技術的革新,其在新guan疫苗研發中的應用,使全qiu首支滅活疫苗快速實現規模化供應,為疫情防控提供關鍵支撐。技術層面,其馴化策略為其他貼壁細胞的懸浮改造提供了范式,已成功應用于 MDCK、HEK293 等細胞系。未來,通過基因編輯過表達 ACE2 與 TMPRSS2,有望進一步提升病毒產量;結合連續灌流培養技術,可實現病毒的連續生產,推動疫苗生產向智能化、高效化發展。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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