PC 61小鼠雜交瘤細(xì)胞系CD25
PC 61小鼠雜交瘤細(xì)胞系CD25由 BALB/c 小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生，因能穩(wěn)定分泌抗 CD25 單克隆抗體，成為免疫研究領(lǐng)域的重要工具。CD25 作為白細(xì)胞介素 - 2 受體 α 鏈，在活化 T 細(xì)胞表面高表達(dá)，是免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，這讓該細(xì)胞系在免疫機(jī)制解析、疾病模型構(gòu)建等方面ji具價(jià)值。
顯微鏡下，PC 61 細(xì)胞呈懸浮生長，形態(tài)以圓形或類圓形為主，直徑約 12-18 微米，像散落在培養(yǎng)基中的 “免疫偵察兵"。胞質(zhì)豐富，內(nèi)含大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，這些是抗體合成與分泌的核心細(xì)胞器，電鏡下可見密集的抗體分泌顆粒。細(xì)胞增殖速度中等，倍增時(shí)間約 36-48 小時(shí)，當(dāng)密度達(dá) 1×10?-2×10?個(gè) / 毫升時(shí)需傳代，按 1:3-1:5 比例接種，連續(xù)傳代 60 次以上仍能穩(wěn)定分泌抗體。
培養(yǎng)該細(xì)胞需模擬雜交瘤生長環(huán)境，基礎(chǔ)培養(yǎng)基選 RPMI 1640，其含有的氨基酸和維生素可滿足高速代謝需求；添加 10% 熱滅活胎牛血清提供生長因子，其中 IL-6 等對維持抗體分泌功能至關(guān)重要。培養(yǎng)箱需嚴(yán)格控制在 37℃、5% CO?，pH 穩(wěn)定在 7.2-7.4，可通過酚紅指示劑監(jiān)測酸堿變化。細(xì)胞對滲透壓敏感，換液時(shí)新舊培養(yǎng)基溫度需一致，避免環(huán)境波動(dòng)影響抗體分泌。
PC 61 細(xì)胞分泌的抗 CD25 單克隆抗體特異性ji強(qiáng)，能精準(zhǔn)識(shí)別小鼠 CD25 分子胞外結(jié)構(gòu)域，解離常數(shù)（Kd）約 10??M，屬高親和力抗體。該抗體為 IgG1 亞型，可通過 Fc 段與免疫細(xì)胞表面 Fc 受體結(jié)合，在流式細(xì)胞術(shù)檢測中，能清晰區(qū)分活化 T 細(xì)胞（CD25?）與靜息 T 細(xì)胞（CD25?），熒光強(qiáng)度是背景信號的 10-20 倍，是分選和鑒定活化 T 細(xì)胞的可靠試劑。
在免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究中，該細(xì)胞系分泌的抗體是解析 CD25 功能的關(guān)鍵。CD25 與 IL-2 結(jié)合后激活 JAK-STAT5 等下游信號通路，促進(jìn) T 細(xì)胞增殖分化。用其抗體阻斷 CD25，能顯著抑制活化 T 細(xì)胞增殖，減少 IL-2、IFN-γ 等細(xì)胞因子分泌，這一特性被廣泛用于研究 T 細(xì)胞耐受與自身免疫的平衡。比如在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，注射該抗體可減少 T 細(xì)胞對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的浸潤，緩解炎癥，為多發(fā)性硬化癥的免疫干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
腫瘤免疫研究中，PC 61 抗體可調(diào)控調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞（Treg）功能。Treg 細(xì)胞高表達(dá) CD25，通過分泌 IL-10 等抑制性細(xì)胞因子抑制抗腫瘤免疫。用該抗體清除 Treg 細(xì)胞后，荷瘤小鼠腫瘤生長明顯減慢，效應(yīng) T 細(xì)胞浸潤和細(xì)胞毒性增強(qiáng) 3-5 倍，為腫瘤研究中的 “去抑制" 策略提供直接證據(jù)。基于抗 CD25 抗體的聯(lián)合療法（如與 PD-1 抑制劑聯(lián)用）在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已顯示協(xié)同抗腫瘤效果，為臨床轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。
抗體藥物開發(fā)領(lǐng)域，該細(xì)胞系是抗 CD25 抗體人源化的原始模板。克隆其抗體可變區(qū)基因，與人類 IgG 恒定區(qū)融合，可構(gòu)建人 - 鼠嵌合抗體，降低臨床應(yīng)用的免疫原性。像抗 CD25 單抗達(dá)克珠單抗的研發(fā)，就源于類似雜交瘤細(xì)胞系的抗體序列，該藥物通過阻斷 IL-2 信號抑制 T 細(xì)胞活化，已用于器官yi植抗排斥治療。
培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞對營養(yǎng)要求較高，需避免培養(yǎng)基內(nèi)毒素過高（<0.1EU/ml），否則會(huì)降低抗體親和力。凍存用含 10% DMSO 的血清凍存液，梯度降溫至 - 80℃后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇存活率超 80%，保障細(xì)胞系長期穩(wěn)定供應(yīng)。
前沿研究中，其應(yīng)用不斷拓展。單細(xì)胞測序助力解析抗體可變區(qū)基因突變模式，揭示抗體親和力成熟機(jī)制，為篩選更高親和力抗 CD25 抗體提供新策略；基因編輯技術(shù)改造該細(xì)胞系，使其分泌帶熒光標(biāo)簽的抗體，可實(shí)時(shí)追蹤與 CD25 的結(jié)合動(dòng)態(tài)，為免疫突觸形成研究提供可視化工具。
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