APN 表達(dá)與受體結(jié)合：膜表面 APN 表達(dá)量達(dá) 7.1×10?分子 / 細(xì)胞（野生型 MDCK 僅為 1.2×103，MDCK-HA 不表達(dá)），可特異性結(jié)合犬冠狀病毒 S 蛋白（結(jié)合率 95%），對豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）的交叉結(jié)合率約 40%；APN 介導(dǎo)的病毒內(nèi)吞效率是野生型細(xì)胞的 12 倍，與 MDCK-HA 的 HA 介導(dǎo)內(nèi)吞機制不同，其依賴 pH 中性條件下的受體構(gòu)象激活。

冠狀病毒復(fù)制支持：對犬冠狀病毒的感染效率達(dá) 98%（野生型為 15%，MDCK-HA 無支持能力），病毒復(fù)制周期縮短至 12 小時（野生型為 24 小時），培養(yǎng)上清中病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL（是野生型的 100 倍）；感染后 48 小時出現(xiàn)典型的細(xì)胞脫落病變（MDCK-HA 感染流感病毒表現(xiàn)為融合病變），與犬冠狀病毒自然感染的細(xì)胞病理特征高度一致。

受體功能特異性：敲除 APN 后，冠狀病毒感染率從 98% 降至 8%，但對流感病毒的敏感性無顯著變化（與 MDCK-HA 的 HA 功能特異性形成呼應(yīng)）；過表達(dá) APN 可使其他犬源細(xì)胞（如 cf2Th）的冠狀病毒感染率提升 8 倍，證實其受體功能的核心性。

受體介導(dǎo)的內(nèi)吞路徑：利用該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，APN 與冠狀病毒 S 蛋白結(jié)合后，通過激活 PI3K/Akt 信號通路（磷酸化水平提升 4 倍）促進內(nèi)吞體形成，與野生型細(xì)胞相比，內(nèi)吞體成熟速度加快 50%；與 MDCK-HA 的酸性依賴融合機制不同，冠狀病毒通過 APN 介導(dǎo)的內(nèi)吞體直接釋放核衣殼（pH 6.5-7.0 條件下效lü最高），明確冠狀病毒te有的入侵路徑。

S 蛋白 - 受體互作位點：通過表達(dá)突變型 APN 的 MDCK-C09 細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，APN 第 294 位天冬氨酸是與 S 蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點（突變后結(jié)合率下降 90%），該位點在犬、豬等動物中高度保守（人與犬的同源性達(dá) 82%），為廣譜冠狀病毒受體阻斷劑設(shè)計提供靶點。

受體阻斷劑篩選模型：建立基于病毒入侵抑制的高通量篩選體系，某小分子化合物可特異性阻斷 APN 與 S 蛋白結(jié)合（IC??=1.8μM），在 MDCK-C09 細(xì)胞中使冠狀病毒復(fù)制下降 99%，對 MDCK-HA 支持的流感病毒無抑制作用（體現(xiàn)與 HA 靶向藥物的特異性差異），動物實驗顯示其可降低犬冠狀病毒感染后的病毒載量 10?倍。

中和抗體效能檢測：利用 APN 高表達(dá)特性，可靈敏評估抗冠狀病毒 S 蛋白抗體的中和活性，某單克隆抗體在該細(xì)胞系中表現(xiàn)出的中和效價是野生型細(xì)胞的 8 倍（EC??=0.03μM），與犬體免疫保護力的相關(guān)性達(dá) 97%（高于 MDCK-HA 對流感抗體的評估效率）。

疫苗株免疫原性評估：通過比較不同冠狀病毒疫苗株在 MDCK-C09 細(xì)胞中的復(fù)制能力與 S 蛋白表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)弱毒株的 S 蛋白突變可導(dǎo)致 APN 結(jié)合力下降 30%，但誘導(dǎo)的中和抗體滴度更高（與 MDCK-HA 評估流感疫苗的 HA 活性指標(biāo)形成對照），為疫苗株減毒機制研究提供依據(jù)。

跨種傳播風(fēng)險評估：表達(dá)人源 ACE2 受體的 MDCK-C09 衍生株，可模擬冠狀病毒跨種感染的受體適應(yīng)過程，發(fā)現(xiàn)某犬冠狀病毒變異株的 S 蛋白突變可使對人 ACE2 的結(jié)合力提升 5 倍，提示潛在跨種傳播風(fēng)險（與 MDCK-HA 研究流感跨種機制的思路一致但對象不同）。

優(yōu)勢：

局限性：