H-4-II-E大鼠肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系
H-4-II-E大鼠肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系作為源自大鼠肝臟惡性腫瘤的細(xì)胞模型，因保留典型肝癌生物學(xué)特征，在肝臟腫瘤發(fā)病機(jī)制與藥物研發(fā)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，成為探究肝細(xì)胞癌惡性增殖、轉(zhuǎn)移及耐藥性的重要實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來源背景：該細(xì)胞系源自大鼠肝癌組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和克隆化建立。細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多為多邊形或不規(guī)則形，胞質(zhì)內(nèi)可見脂滴空泡，約占細(xì)胞總數(shù)的 15%，細(xì)胞核大而畸形，核仁明顯，核質(zhì)比顯著升高，約 30% 細(xì)胞呈現(xiàn)多核現(xiàn)象。生長方式為貼壁生長，排列疏松，無明顯接觸抑制，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 90%。核心參數(shù)表現(xiàn)出腫瘤特征：倍增時(shí)間約 48 小時(shí)，連續(xù)傳代 50 次后仍保持異常染色體核型（染色體數(shù)約 44-46 條）；肝癌相關(guān)標(biāo)志物甲胎蛋白（AFP）、熱休克蛋白 70（HSP70）免疫熒光染色陽性率達(dá) 93%，白蛋白分泌量僅為正常肝細(xì)胞的 35%；無細(xì)菌、真菌、支原體及病毒污染，細(xì)胞純度達(dá) 96%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在肝癌增殖機(jī)制研究中，H-4-II-E 細(xì)胞高表達(dá)細(xì)胞周期蛋白 Cyclin E，其 mRNA 水平較正常肝細(xì)胞升高 3.2 倍，經(jīng)絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑處理后，增殖活性下降 58%，可模擬肝癌細(xì)胞異常增殖的分子過程，為解析癌變信號通路提供理想模型。腫瘤轉(zhuǎn)移研究方面，該細(xì)胞在 Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿膜細(xì)胞數(shù)是正常肝細(xì)胞的 8.7 倍，基質(zhì)金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）分泌量增加 4.3 倍，經(jīng)整合素抗體干預(yù)后轉(zhuǎn)移能力降低 62%，能很好地模擬肝癌侵襲轉(zhuǎn)移特性，助力轉(zhuǎn)移相關(guān)基因功能的探究。藥物篩選領(lǐng)域，該細(xì)胞對不同抗腫瘤藥物敏感性存在差異，經(jīng)相關(guān)藥物處理后凋亡率差異顯著（18%-45%），適用于評估抗腫瘤藥物的療效及耐藥機(jī)制。此外，將細(xì)胞與肝星狀細(xì)胞共培養(yǎng)，可構(gòu)建體外肝癌微環(huán)境模型，用于研究腫瘤微環(huán)境對肝癌進(jìn)展的影響。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，添加 1% 非必需氨基酸、1mM 丙酮酸鈉及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，避免代謝廢物堆積。傳代時(shí)采用含 EDTA 的消化液處理，37℃孵育 5-7 分鐘，待細(xì)胞邊緣回縮后加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，傳代比例為 1:3-1:5，每 3-4 天傳代一次，維持細(xì)胞融合度在 70%-80% 以保持腫瘤特性。凍存液配方為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇細(xì)胞存活率達(dá) 88% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常增殖能力。運(yùn)輸采用干冰凍存管或 T-25 培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無異常漂浮物后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需嚴(yán)格遵循腫瘤細(xì)胞生物安全規(guī)范。
H-4-II-E 大鼠肝細(xì)胞瘤系以其穩(wěn)定的惡性表型、明確的分子特征及易于培養(yǎng)的優(yōu)勢，在肝癌基礎(chǔ)研究與藥物開發(fā)中發(fā)揮著重要作用，為揭示肝臟腫瘤的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新型靶向治療策略提供了可靠的實(shí)驗(yàn)平臺。
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