LS 174T人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系
LS 174T人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系源自男性結(jié)腸腺癌患者的腫瘤組織，于 20 世紀(jì) 70 年代初被成功建立。在顯微鏡下觀察，其細(xì)胞呈現(xiàn)典型的上皮樣形態(tài)，細(xì)胞相互連接，形成緊密的單層或簇狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞大小和形態(tài)存在一定差異，這種異質(zhì)性與人體結(jié)直腸腺癌腫瘤組織的細(xì)胞特征高度相似。其核型為超二倍體，存在多個(gè)染色體畸變，同時(shí)攜帶多種關(guān)鍵基因突變，例如 KRAS 基因突變、p53 通路相關(guān)基因缺失等，這些遺傳特征不僅賦予細(xì)胞惡性增殖的能力，也為腫瘤研究提供了豐富的靶點(diǎn)。
HCT - 15 細(xì)胞的培養(yǎng)需特定且精細(xì)的條件。常用 RPMI - 1640 培養(yǎng)基，添加 10% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清和 1% 雙抗，以滿足細(xì)胞生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)，維持無菌環(huán)境。其中，胎牛血清富含細(xì)胞生長(zhǎng)必需的生長(zhǎng)因子、激素、結(jié)合蛋白等物質(zhì)，能有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁和增殖；雙抗則防止細(xì)菌和真菌污染，保障細(xì)胞健康生長(zhǎng)。培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% 二氧化碳與 95% 空氣的混合氣體，濕度保持在 70% - 80%。37℃模擬人體體溫，5% 二氧化碳可維持培養(yǎng)基的 pH 穩(wěn)定，適宜的濕度避免培養(yǎng)基過快蒸發(fā)。
細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，當(dāng)匯合度達(dá) 80% - 90% 時(shí)需傳代。傳代使用 0.25％（w/v）胰dan白酶 - 0.53mM EDTA 消化，由于細(xì)胞貼壁較緊，消化時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，約 1 - 2 分鐘。在消化過程中，需在顯微鏡下密切觀察細(xì)胞形態(tài)變化，當(dāng)細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，及時(shí)終止消化，避免過度消化損傷細(xì)胞。若出現(xiàn)消化困難的情況，可適當(dāng)提高胰dan白酶濃度或延長(zhǎng)消化時(shí)間，但需格外注意觀察。消化后，需迅速加入含血清的培養(yǎng)基中和胰dan白酶活性，防止殘留胰dan白酶繼續(xù)作用。傳代比例一般為 1:2 - 1:4 ，傳代后需定期更換培養(yǎng)基，保證細(xì)胞有充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。凍存時(shí)，凍存液采用 90% 胎牛血清加 10% 二甲基亞砜，按 4℃ 10 分鐘、-20℃ 2 小時(shí)、-80℃過夜后轉(zhuǎn)至液氮的程序保存，每一步降溫都能減少細(xì)胞內(nèi)冰晶形成，保護(hù)細(xì)胞活性。值得注意的是，復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，需將凍存管迅速放入 37℃水浴中快速解凍，以減少低溫對(duì)細(xì)胞的損傷。若復(fù)蘇后細(xì)胞活力不佳，可嘗試降低傳代密度，給予細(xì)胞更寬松的生長(zhǎng)環(huán)境。
在科學(xué)研究中，HCT - 15 細(xì)胞系應(yīng)用廣泛。利用該細(xì)胞系構(gòu)建的耐藥模型，如 HCT - 15/5FU 細(xì)胞系，是研究氟尿*啶耐藥機(jī)制的重要工具。研究發(fā)現(xiàn)，HCT - 15/5FU 細(xì)胞的耐藥涉及胸苷酸合成酶上調(diào)、二氫嘧啶脫氫酶活性增強(qiáng)、藥物外排與解毒系統(tǒng)激活等多個(gè)方面。通過對(duì) HCT - 15 細(xì)胞的研究，不僅能深入探索腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制，還能進(jìn)行抗癌藥物篩選、評(píng)估藥物療效。例如，在前沿研究中，科研團(tuán)隊(duì)將新型免疫檢查點(diǎn)抑制劑與傳統(tǒng)hua療藥物聯(lián)合作用于 HCT - 15 細(xì)胞，觀察到兩者協(xié)同作用顯著增強(qiáng)了對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果，為結(jié)直腸癌的免疫 - hua療聯(lián)合治療策略提供了理論依據(jù)。還有研究團(tuán)隊(duì)運(yùn)用 HCT - 15 細(xì)胞測(cè)試新型納米靶向藥物，該藥物能夠精準(zhǔn)識(shí)別并作用于癌細(xì)胞表面的特定受體，相比傳統(tǒng)藥物，其對(duì) HCT - 15 細(xì)胞的抑制效果更好且副作用更小。此外，通過基因編輯技術(shù)對(duì) HCT - 15 細(xì)胞的特定基因進(jìn)行敲除或過表達(dá)，可探究基因在腫瘤發(fā)展中的功能，從而發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，為結(jié)直腸癌的臨床治療提供更多潛在方向。
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